Az áramlási citometria lehetséges felhasználása FACS alkalmazásával

A FACS rövidítés jelentése fluorescenciaactivált cell sorting. Ez az áramlási citometria egy speciális formája, amelyben a fluoreszcenciával jelölt sejtek mérhetők és elemezhetők. A sejtek folyadékáramban áramlanak egy lézersugáron keresztül, és meghatározzák a sejtek méretét, belső szerkezetét és a fluoreszcencia relatív intenzitását. Számos sejttípushoz rendelkezésre állnak fluoreszcenciával jelzett antitestek, különösen a limfociták, amelyek a sejtek immunfenotípusos felületi jellemzői (differenciálási klaszter, rövidítve "CD") ellen irányulnak. Ezekkel a CD-markerekkel mostantól felhasználható a sejtek vizsgálata és szorosabb azonosítása. Például a citotoxikus T-sejt limfociták pozitívak a CD3 és CD8 esetében, de negatívak a CD21 és CD4 esetében.

Ezt a vizsgálatot használják a rutin diagnosztikában, különösen a hematológiában. Mivel a vizsgálati anyagnak folyékony formában kell lennie, a vérminták különösen alkalmasak. Az értelmes eredmény biztosítása érdekében fontos, hogy a sejtek épek legyenek, ezért a vizsgálatot a lehető leghamarabb, legfeljebb 3 napon belül el kell végezni. A LABOKLIN-nál a FACS eszközt különféle fontos vizsgálatokhoz használják.

1. Trombocita antitestek

A vérlemezkék felszínén megnövekedett immunglobulin (túlnyomórészt IgG) a trombociták makrofágok általi korai fagocitózisához vezet, trombocitopénia következményeivel. Ez az immunmediált thrombocytopenia (IMT) lehet primer vagy szekunder. A ritka primer formát a thrombocyta-specifikus epitópok ellen irányuló autoantitestek okozzák. A másodlagos immunmediált trombocitopénia viszont különféle gyógyszerekkel, fertőző ágensekkel (baktériumok, vírusok, protozoonok vagy heminták), neopláziával és más immunmediált betegségekkel társul.

Az elsődleges IMT-t főleg kutyáknál, kétszer olyan gyakran nőstényekben, mint hím kutyákban, minden korcsoportban, de leggyakrabban középkorú állatoknál figyelik meg. Hajlamos fajták: a cocker spániel, a miniatűr és a játék uszkár, a régi angol juhászkutya (Bobtail), az arany-retriever és a német juhászkutya.
A mért vérlemezkeszám általában kevesebb, mint 30 G/l az elsődleges IMT esetén, mint a másodlagos forma esetén.

A diagnosztika elvégezhető FACS alkalmazásával, antitrombocita antitest kimutatással. Kettős inkubációt hajtunk végre a vérlemezkékhez kötött IgG kimutatására. A 30% -os antitestszintet pozitív bizonyítékként értékelik az IMT szempontjából. Az értékelhető immunfestés elérése érdekében a minta anyaga (EDTA teljes vér) nem lehet 3 napnál régebbi. A vizsgálatot az immunszuppresszív kezelés megkezdése előtt meg kell kezdeni, különben hamis-negatív eredmények jelentkeznek. További diagnosztikai lehetőségek a kortizon diagnosztikai terápia és a csontvelőben megakaryocytás hiperplázia kimutatása.

2. Sejt immunállapot

A sejtek immunállapota magában foglalja a teljes vérképet, valamint a perifériás limfociták relatív és abszolút számának meghatározását: B-sejtek, összes T-sejt, valamint CD4 + (T segítő sejtek) és CD8 + sejtek (citotoxikus T-sejtek).

A vér immunfenotipizálása a sejtfelszíni antigének fluoreszcens festékkel jelzett monoklonális antitestek szelektív felismerésén alapul áramlási citometriával (FACS). A sejt immunállapotának vizsgálata akkor javasolt, ha a klinikai tünetek primer vagy másodlagos rendellenességre utalnak a celluláris immunrendszerben.

Kutyáknál az immunstátusz megállapítása hasznos lehet a pyoderma, a demodikózis, a szisztémás lupus erythematosus és a leishmaniasis, valamint a veleszületett T-sejt-hibák diagnosztizálásában. Utóvizsgálatok alkalmazhatók a kontrollra és a gyógyszerterápia dózisának kiigazítására.
Lovaknál a gyakori és elhúzódó fertőzések tisztázására szolgál.

Az immunstátusz meghatározása különleges szerepet játszik a macska immunhiányos vírus (FIV) fertőzésében.

A vírus krónikus, tartós fertőzéseket okoz a betegség progresszív lefolyásával. Az immunkompetens sejtek fertőzése fokozatosan kimeríti az immunrendszert.

A vírus markáns tropizmust mutat a T-limfociták és a makrofágok tekintetében. A károsodás elsősorban a T-limfocita funkciókat érinti, a T-segítő sejtpopuláció mennyiségi és minőségi hibái dominálnak. Először is, a CD8 + sejtek növekedése a CD4 + sejtek számának százalékos csökkenéséhez vezet. A CD8 + sejtek száma a fertőzés tünetmentes periódusában továbbra is növekszik, és csak a klinikai tünetek kialakulása előtt röviddel csökken. A fertőzés kezdetén főleg a CD4 + sejtek fertőzöttek, itt található a legnagyobb mennyiségű vírus. A fertőzés előrehaladtával a CD4 + sejtek abszolút csökkenése a CD4 +/CD8 + hányados csökkenéséhez vezet.

A humorális immunvédelem funkciójában viszonylag későn mutat károsodást. A B-sejtek számának csökkenése általában csak az utolsó szakaszban megy végbe. A vírus mennyisége a vérben ismét jelentősen megnő, de antitestválasz már nem történik meg.

Az immunstátusz megteremtése tehát felmérheti a prognózist primer vagy szekunder immunhiány esetén.

3. Leukémia differenciálás

30 G/l> limfocitózis esetén vagy limfoproliferatív betegségben (leukémia, V. limfóma stádium), amelyet klonalitási teszt (PARR) igazol, és amelynek minimális leukocitaszáma> 5 G/l, leukémiás differenciálódás hajtható végre FACS segítségével. A sejtek azonosítására szolgáló CD-markerek felhasználásával ez a vizsgálat felhasználható az akut vagy krónikus leukémia (CD34: őssejt-marker) osztályozására, amelyek fontos információkkal szolgálhatnak a prognózisról és a terápia megválasztásáról. Továbbá a neoplasztikus sejtek feloszthatók B-sejtekre és T-sejtes limfocitákra és altípusokra.